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瓊脂培養(yǎng)基，作為微生物學(xué)實驗中的基礎(chǔ)工具，以其的物理和化學(xué)性質(zhì)，在細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定、分離及保存等方面發(fā)揮著重要作用。本文將從瓊脂培養(yǎng)基的定義、制備、使用及保存等方面進(jìn)行詳細(xì)闡述。

一、瓊脂培養(yǎng)基的定義

瓊脂培養(yǎng)基，英文名稱為agar-based medium，是2019年公布的結(jié)核病學(xué)名詞。它是以瓊脂作為賦形劑的固體培養(yǎng)基，通過瓊脂的凝固作用，為微生物提供一個穩(wěn)定的生長環(huán)境。瓊脂粉一般為白色、淡黃色或淡灰色粉末狀，在冷水中不溶解，但加熱煮沸或高壓滅菌后可使瓊脂溶解，冷卻后凝成固態(tài)。

二、瓊脂培養(yǎng)基的制備

瓊脂培養(yǎng)基的制備過程相對復(fù)雜，但每一步都至關(guān)重要。以下是制備瓊脂培養(yǎng)基的基本步驟：

1. 準(zhǔn)備原料：根據(jù)實驗需求，稱取適量的瓊脂粉、蛋白胨、酵母浸粉、葡萄糖等原料。

2. 溶解混合：將原料加入適量的純化水中，攪拌均勻，確保無團(tuán)塊。注意水溫不宜過高，以免瓊脂表面吸水變硬。

3. 調(diào)整pH值：使用酸堿溶液調(diào)整培養(yǎng)基的pH值至適宜范圍，通常為7.0左右。

4. 加熱滅菌：將混合均勻的培養(yǎng)基進(jìn)行高溫高壓滅菌處理，以殺滅其中的細(xì)菌和其他微生物。滅菌條件一般為121°C、15-20分鐘。

5. 分裝凝固：將滅菌后的培養(yǎng)基分裝至試管或培養(yǎng)皿中，待其冷卻凝固。

三、瓊脂培養(yǎng)基的使用

瓊脂培養(yǎng)基在微生物學(xué)實驗中有著廣泛的應(yīng)用。以下是其主要用途：

1. 細(xì)菌培養(yǎng)：將待培養(yǎng)的菌種接種到瓊脂培養(yǎng)基上，通過劃線、點(diǎn)菌或涂抹等方式，使細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長并形成菌落。通過觀察菌落的形態(tài)、大小、顏色等特征，可以進(jìn)一步鑒定和分離細(xì)菌。

2. 菌落計數(shù)：利用瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌計數(shù)，通過統(tǒng)計培養(yǎng)基上的菌落數(shù)量，可以評估樣品中細(xì)菌的含量。

3. 菌種保存：瓊脂培養(yǎng)基還可以用于菌種的長期保存。通過調(diào)整瓊脂的添加量，可以制備出適合菌種保存的半固體培養(yǎng)基。

四、瓊脂培養(yǎng)基的保存

瓊脂培養(yǎng)基的保存對于保持其質(zhì)量和延長使用壽命至關(guān)重要。以下是保存瓊脂培養(yǎng)基的注意事項：

1. 保存溫度：購買的一次性細(xì)菌培養(yǎng)平板一般應(yīng)放置在4℃冰箱中保存，但也有文獻(xiàn)指出，室溫保存可能更有利于細(xì)菌培養(yǎng)基。然而，對于已經(jīng)開啟包裝或自制的培養(yǎng)基，應(yīng)盡量避免長時間室溫保存，以防細(xì)菌污染。

2. 保存時間：保存時間與平板的密封程度、培養(yǎng)基厚度、冰箱環(huán)境等因素有關(guān)。購買的一次性培養(yǎng)基通常有包裝袋密封，保存時間可達(dá)1個月至6個月不等。而已經(jīng)開啟包裝或自制的培養(yǎng)基，保存時間較短，一般不宜超過半個月。

3. 存放方式：培養(yǎng)基應(yīng)倒置存放，避免冷凝水珠滴落到培養(yǎng)基上。同時，應(yīng)將培養(yǎng)基放置在遠(yuǎn)離風(fēng)扇、細(xì)菌培養(yǎng)物、水汽循環(huán)的冰箱部位，以防水分蒸發(fā)和霉菌生長。

4. 觀察與檢查：在使用前，應(yīng)仔細(xì)觀察培養(yǎng)基是否干裂、污染雜菌。如有異常，應(yīng)及時處理并更換新的培養(yǎng)基。

五、結(jié)論

瓊脂培養(yǎng)基作為微生物學(xué)實驗中的基礎(chǔ)工具，其制備、使用及保存都需嚴(yán)格遵守相關(guān)操作規(guī)程。通過科學(xué)合理的制備和保存方法，可以確保瓊脂培養(yǎng)基的質(zhì)量和穩(wěn)定性，為微生物學(xué)實驗提供可靠的支持。